Las coloraciones de laboratorio son técnicas fundamentales en el diagnóstico microbiológico, hematológico y anatomopatológico. Permiten diferenciar estructuras celulares, identificar microorganismos y caracterizar células sanguíneas mediante el uso de colorantes específicos. En esta guía explicamos las coloraciones más utilizadas en el laboratorio clínico: Gram, Giemsa, Ziehl-Neelsen y otras técnicas complementarias.
Coloración de Gram: paso a paso
La coloración de Gram es la técnica de tinción bacteriológica más utilizada en el mundo. Desarrollada por Hans Christian Gram en 1884, clasifica las bacterias en dos grupos: Gram positivas (moradas/violeta) y Gram negativas (rosa/rojo). Esta clasificación es determinante en la selección empírica de antibióticos.
Reactivos para la coloración de Gram
- Cristal violeta: Colorante primario. Tiñe todas las bacterias de morado. Disponible: Cristal Violeta de Gram x 500 mL – Albor.
- Lugol de Gram: Mordiente. Fija el cristal violeta en Gram positivas. Disponible: Lugol de Gram x 500 mL – Albor.
- Decolorante (alcohol-acetona): Elimina el complejo cristal violeta-lugol de las Gram negativas.
- Safranina de Gram: Colorante de contraste. Tiñe de rosa las Gram negativas. Disponible: Safranina de Gram x 500 mL – Albor.
Procedimiento de la coloración de Gram
- Extendido y fijación: Realizar frotis fino de la muestra, secar al aire y fijar con calor o metanol.
- Cristal violeta: Cubrir el extendido durante 1 minuto. Lavar con agua destilada.
- Lugol de Gram: Aplicar durante 1 minuto. Lavar con agua destilada.
- Decoloración: Alcohol-acetona 10-30 segundos hasta que no escurra color. Lavar de inmediato.
- Safranina: Cubrir 1 minuto. Lavar con agua destilada.
- Secar y observar: Con objetivo de inmersión (100x) con aceite.
Interpretación: Gram positivas vs Gram negativas
- Gram positivas (moradas): Staphylococcus, Streptococcus, Clostridium, Bacillus.
- Gram negativas (rosas): E. coli, Klebsiella, Pseudomonas, Neisseria.
Coloración de Giemsa: procedimiento y usos clínicos
La coloración de Giemsa es una técnica policromática desarrollada por Gustav Giemsa en 1902. Utiliza una mezcla de colorantes (azul de metileno, eosina y azur) que permiten identificar con gran detalle morfología celular y microorganismos intracelulares.
Para que se usa la tinción de Giemsa
- Diagnóstico de malaria: Gold standard para la detección de Plasmodium en gota gruesa y frotis de sangre periférica.
- Diagnóstico de leishmaniasis: Visualiza amastigotes de Leishmania en macrofágos.
- Hematología: Evaluación morfológica de células sanguíneas en frotis periférico.
- Diagnóstico de Trypanosoma: Detecta tripomastigotes en sangre periférica (Chagas).
- Citología e histología: Evaluación de infiltrados inflamatorios.
Procedimiento de la coloración de Giemsa
- Preparación del frotis: Realizar gota gruesa (para malaria) y frotis delgado en el mismo portaobjetos.
- Fijación: El frotis delgado con metanol 1-2 min. La gota gruesa NO se fija con metanol.
- Solución de Giemsa: Diluir el colorante con agua tamponada pH 7.2 en proporción 1:10 (v/v).
- Tinción: Cubrir el extendido 15-20 minutos (tinción rápida) o 30-45 minutos (tinción lenta para mayor detalle).
- Lavado: Con agua tamponada pH 7.2 (no agua destilada pura).
- Secar al aire y observar con objetivo 40x y luego con inmersión (100x).
Interpretación: coloración de Giemsa en malaria
- Eritrocitos: Rosa pálido.
- Cromatina de parásitos: Rojo brillante o rojo-violeta.
- Citoplasma de parásitos: Azul cielo.
- Pigmento malárico (hemozoina): Negro o marrón oscuro.
- Granulaciones de Schüffner (P. vivax): Puntos rosados en erit rocitos.
Coloración de Ziehl-Neelsen: Bacilos Ácido-Alcohol Resistentes
La coloración de Ziehl-Neelsen (ZN) es la técnica de referencia para el diagnóstico de tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis). Las micobacterias retienen la fucsina fenicada incluso después de la decoloración con ácido-alcohol, propiedad que les da el nombre de «bacilos ácido-alcohol resistentes» (BAAR).
Procedimiento de Ziehl-Neelsen
- Frotis de esputo (muestra de elección), fijar con calor.
- Fucsina fenicada: Cubrir y calentar con llama hasta emisión de vapores durante 5 minutos (método caliente) o dejar 15-20 minutos a temperatura ambiente.
- Lavar con agua.
- Decoloración: HCl al 3% en alcohol 95° durante 2-3 minutos hasta que el extendido sea rosa pálido.
- Lavar con agua.
- Azul de metileno: Cubrir 1 minuto como colorante de contraste.
- Lavar, secar y observar. Los BAAR aparecen rojo brillante sobre fondo azul.
| Resultado | BAAR observados |
|---|---|
| Negativo | 0 BAAR en 100 campos |
| + | 1-9 BAAR en 100 campos |
| ++ | 1-9 BAAR por campo en 50 campos |
| +++ | 10 o más BAAR por campo en 20 campos |
Otras coloraciones importantes
Coloración de Wright
Estándar de oro para la evaluación morfológica del frotis de sangre periférica en hematología. Diferencia eritrocitos, leucocitos (neutrofilos, eosinófilos, basófilos, linfocitos, monocitos) y plaquetas.
May-Grunwald-Giemsa (MGG)
Combinación de May-Grünwald y Giemsa. Especialmente útil en hematooncología para el diagnóstico de leucemias y linfomas, y para el estudio de médula ósea.
Coloración PAS
Detecta polisacáridos y glucogeno. Útil para identificar hongos en tejidos (Candida, Aspergillus), diagnóstico diferencial de leucemias y patología renal.
Reactivos para coloraciones de laboratorio en Sanchez Carpio
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Preguntas frecuentes sobre coloraciones de laboratorio
Qué es la coloración de Giemsa y para que se usa?
La coloración de Giemsa es una técnica policromática usada para diagnóstico de malaria (Plasmodium), leishmaniasis, Trypanosoma y evaluación morfológica de células sanguíneas en el frotis de sangre periférica.
Qué es el lugol de Gram y cual es su función?
El lugol de Gram es una solución yodo-yodurada que actúa como mordiente en la coloración de Gram. Fija el complejo cristal violeta-yodo en la pared celular de las bacterias Gram positivas, impidiendo que el decolorante lo elimine.
Qué es el cristal violeta y por qué es esencial en la tinción de Gram?
El cristal violeta es el colorante primario de la tinción de Gram. Tiñe todas las bacterias de color morado en el primer paso. Tras la aplicación de lugol y decolorante, solo las Gram positivas retienen este color.
Qué diferencia hay entre coloración de Giemsa y tinción de Ziehl-Neelsen?
La coloración de Giemsa es policromática y se usa para parásitos y morfología celular. La tinción de Ziehl-Neelsen es específica para bacilos ácido-alcohol resistentes (tuberculosis y micobacterias). Son técnicas con objetivos diagnósticos completamente diferentes.
Qué es la fucsina de Gram?
La fucsina de Gram es el colorante de contraste alternativo a la safranina en algunas versiones de la coloración de Gram. También es el colorante principal en la coloración de Ziehl-Neelsen, donde se usa en forma de fucsina fenicada para teñir los BAAR.
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